固相萃取主要通过目标物与吸附剂之间的以下作用力来保留/吸附的 1)疏水作用力:如C18、C8、Silica、苯基柱等 2)离子交换作用:SAX, SCX,COOH、NH2等 3)物理吸附:Florsil、 Alumina等 p H值对固相萃取的影响 pH值可以改变目标物/吸附剂的离子化或质子化程度。对于强阳/阴离子交换柱来讲,因为吸附剂本身是完全离子化的状态,目标物必须完全离子化才可以保证其被吸附剂完全吸附保留。而目标物的离子化程度则与pH值有关。如对于弱碱性化合物来讲,其pH值必须小于其pKa值两个单位才可以保证目标物完全离子化,而对于弱酸性化合物,其pH值必须大于其pKa值两个单位才能保证其完全离子化。对于弱阴/阳离子交换柱来讲,必须要保证吸附剂完全离子化才保证目标物的完全吸附,而溶液的pH值必须满足一定的条件才能保证其完全离子化。 固相萃取的保留机制可分为两种: 吸附剂(填料)保留目标化合物:绝大多数化合物应用此机制,填料保留其目标组分及少量杂质,通过淋洗步骤去除吸附在柱上的少量杂质,*后选择合适的(洗脱)溶剂把目标组分洗脱下来。 根据吸附剂的保留机理可进一步分为: (1)反相(C18,C8,CN,Phenyl,C4,C1) ·分析物:非极性至中等极性 · 基质:水溶性 · 方法: a.活化:通常用水溶性有机溶剂如甲醇活化,然后用水平衡 b.淋洗:含0-50%极性溶剂的缓冲溶液淋洗杂质 c.洗脱:极性或非极性溶剂洗脱目标物 (2)正相(Silica, Florisil,Diol,NH2) ·分析物:中等极性到强极性 · 基质:非极性至中等极性 · 方法: a.活化:非极性有机溶剂 b.洗脱:非极性有机溶剂 (3)阳离子交换(SCX,PRS,COOH) ·分析物:阳离子(碱性)化合物 · 方法: a.活化:用于非极性有机溶剂中的样品时,可用样品溶剂来活化;在用于极性溶剂中的样品时,可用水溶性有机溶剂过柱后,然后用水平衡,*后再用适当pH值的缓冲溶液进行平衡。 b.上样:样品溶液pH值要小于其pKa两个单位(以保证其带电荷) c.洗脱:洗脱溶液pH值要大于其pKa两个单位(中和分析物的电荷) (4)阴离子交换(SAX,PSA,NH2,PAX/MAX ) ·分析物:阴离子(酸性)化合物 · 方法: a.活化:用于非极性有机溶剂中的样品时,可用样品溶剂来活化;在用于极性溶剂中的样品时,可用水溶性有机溶剂活化后,然后用水平衡,*后再用适当pH值的缓冲溶液进行平衡。 b.上样:样品溶液pH值要大于其pKa两个单位(以保证其带电荷)。 c.洗脱:洗脱溶液pH值要小于其pKa两个单位(中和分析物的电荷)。 (5)吸附剂(填料)保留杂质 食品中色素等杂质的去除多用此机制。填料保留杂质而不保留或只保留极少量的目标组分,所以上样后即开始收集目标组分,*后用目标物所在的溶剂进一步洗脱。合并两部分收集液。 a.活化:以样品所在的有机溶剂进化活化,1~2柱管体积 b.上样:提取液转移至柱内,并收集流出液 c.洗脱:用样品所在的有机溶剂进一步洗脱,收集流出液。合并上样和洗脱流出液。 原创作者:北京优晟联合科技有限公司 |